Reactius extracció ADN tires Bento DS-KIT. Capsa 100 assaigs

Descripció

El kit d'extracció d'ADN amb tira dipàtica és una manera molt ràpida d'extreure ADN i netejar els contaminants. La mostra resultant es pot utilitzar per a assaigs de PCR, seqüenciació i codis de barres d'ADN. El mètode va ser desenvolupat i publicat per Zou et al. (2017) .

Amb uns costos baixos per mostra, aquest mètode proporciona una alternativa assequible i fiable als mètodes d'extracció basats en columnes per a mostres amb molt poc ADN que requereixen la neteja d'inhibidors. Aquest mètode no és adequat per a protocols que requereixen l'extracció total d'ADN per a l'ADN genòmic. 

Composició del reactiu

Tampó d'extracció : Tris-HCl 20 mM, NaCl 25 mM, EDTA 2,5 mM, SDS al 0,05%, PVP-40 al 2%, pH 8.

Tampó de rentat : Tris-HCl 10 mM, pH 8

Varetes de mesura : filtre a base de cel·lulosa, cera

Emmagatzematge i estabilitat

Sense obrir: conservar a temperatura ambient (18–25 °C) durant un màxim d'1 any.

Un cop obert: conservar a temperatura ambient (18–25 °C) durant un màxim d'1 any. El tampó d'extracció i el tampó de rentat també es poden refrigerar (~4 ºC) o congelar (–20 ºC) per reduir la possibilitat de contaminació microbiana o per a un emmagatzematge a llarg termini. Si el tampó d'extracció es refrigera o congela, s'ha d'escalfar en un recipient amb aigua molt calenta per tornar a dissoldre el detergent precipitat.

Condicions d'enviament

Enviat a temperatura ambient.

Protocol d'inici ràpid

Utilitzeu guants, utilitzeu equips estèrils i pràctiques de treball estèrils.

1. Pipetegeu de 100 a 200 µL de tampó d'extracció en un tub d'1,5 mL. 
2. Afegiu una mostra de teixit d'1-2 mm3 ^al tub utilitzant instruments estèrils. 
3. Tritureu la mostra amb una maça estèril durant 10 segons o més, fins que el teixit estigui majoritàriament polvoritzat.
4. Afegiu de 300 a 400 µL de tampó d'extracció per a un volum total de 500 µL i tanqueu el tub.
5. Pipetegeu 1 mL de tampó de rentat en un tub buit d'1,5 mL i tanqueu la tapa. 
6. Si feu servir la mostra immediatament, prepareu la mescla de PCR en tubs de 0,2 mL.
7. Submergiu l'extrem destapat (la zona d'unió) de la tira reactiva al tampó d'extracció tres vegades per capturar l'ADN. Comproveu que la zona d'unió estigui completament xopa.
8. Submergiu suaument la zona d'unió de la vareta reactiva al tub de tampó de rentat cinc vegades.
9. Traieu la tira reactiva del líquid i netegeu suaument la vora del tub amb la tira reactiva per eliminar les gotes de tampó de rentat. Descarteu el tub de tampó de rentat. La zona d'unió de la tira reactiva contindrà l'ADN rentat.
10. Submergiu la tira reactiva a la barreja de PCR fins a 15 vegades per alliberar l'ADN.
    Consell : Empenyeu la tira reactiva al fons del tub fins que es doblegui. Això ajuda al líquid a moure's a través del paper i augmenta la quantitat d'ADN alliberada. 
11. Netegeu la vareta reactiva a la vora del tub de 0,2 mL per eliminar qualsevol gota de mescla de PCR. La reacció de PCR ja està a punt per començar. 
12. Alternativament, guardeu l'ADN en tampó TE per utilitzar la mostra més tard. Allibereu l'ADN submergint la tira reactiva en un tub d'1,5 mL de tampó TE i guardeu-lo a 4 °C durant un curt termini o congelau-lo a –20 °C per a un emmagatzematge a llarg termini.