Reactius extracció ADN solucions Bento HS-KIT. Capsa 400 assaigs

Descripció

El kit d'extracció d'ADN HotSHOT proporciona un mètode de lisi alcalina ràpid, econòmic i fiable per extreure ADN de qualitat PCR d'una àmplia gamma de teixits rics en ADN. Els teixits diana suggerits inclouen teixits animals, des de mamífers fins a peixos i invertebrats. Aquest protocol també s'ha utilitzat amb èxit per extreure ADN de fongs, plantes i bacteris, tot i que algunes mostres poden ser més problemàtiques a causa de la presència d'inhibidors de la PCR.

El kit utilitza una solució alcalina diluïda que s'escalfa amb la mostra en un termociclador (com ara Bento Lab) per lisar (descompondre) les cèl·lules i alliberar i desnaturalitzar l'ADN. Aquesta solució es neutralitza amb una solució tampó de pH per baixar el pH i estabilitzar l'ADN alliberat. El protocol implica un procés senzill de dos passos de lisi i neutralització cel·lular, que només triga entre 10 i 30 minuts (segons el tipus de mostra) un cop les mostres es col·loquen en tubs. Un format d'un sol tub minimitza els requisits de manipulació, reduint la contaminació potencial i la pèrdua d'ADN, i permetent que les mides de les mostres es puguin ampliar fàcilment segons calgui.

Les extraccions per lisi alcalina són ideals per a teixits rics en ADN que tenen un baix contingut de substàncies inhibidores de la PCR. Els seus principals avantatges són el cost molt baix per mostra, la facilitat d'ús i l'escalabilitat des d'una sola mostra fins a centenars de mostres. Per això, s'utilitzen àmpliament per a aplicacions que van des de la genotipificació rutinària fins a la detecció de patògens i el codi de barres d'ADN. No són adequades per a mostres amb altes concentracions de compostos inhibidors de la PCR o aplicacions que requereixen l'extracció d'ADN total, ADN no fragmentat o ADN bicatenari.

El nostre kit d'extracció d'ADN HotSHOT conté una formulació lleugerament modificada per allargar la vida útil del producte.

Recomanacions d'aplicació

• Per a ús amb una àmplia gamma de teixits animals, així com alguns teixits vegetals, fúngics i vegetals.

La lisi alcalina HotSHOT s'ha utilitzat per extreure ADN de teixits de mamífers, aus i peixos; d'invertebrats, paràsits animals i menjars de sang de paràsits, i ous zooplanctònics. També s'ha utilitzat per extreure ADN de fulles de plantes joves, pol·len, cultius líquids i d'agar per a fongs, cossos fructífers diminuts de fongs i patògens fúngics en teixits vegetals.

• Un protocol senzill per a extraccions ràpides, adequat per a rendiments de baix a alt

L'ADN es pot extreure de manera eficient en 10-30 minuts utilitzant només un tub de PCR de 0,2 mL per mostra. La manipulació mínima significa que les reaccions es poden ampliar des d'unes poques extraccions fins a centenars al dia.

• Una solució de baix cost per a projectes amb un pressupost reduït però mostres grans

Les extraccions per lisi alcalina permeten l'extracció d'ADN a una fracció del cost d'altres mètodes d'extracció, estalviant diners per a reactius més cars.

• Molt més segur que la majoria de reactius d'extracció d'ADN

La solució de lisi alcalina HotSHOT és molt diluïda (25 mM o 0,1% p/v) i no es considera irritant ni perillosa segons les regulacions i classificacions harmonitzades de la UE i globalment. Les extraccions tampoc impliquen l'ús d'etanol. Per tant, és considerablement més segura que molts altres mètodes d'extracció d'ADN que impliquen sals de guanidi o cloroform.

• No és adequat per extreure grans quantitats d'ADN no fragmentat d'alta qualitat

El mètode de lisi alcalina HotSHOT no és adequat per a aplicacions que requereixen l'extracció de grans quantitats d'ADN no fragmentat d'alta qualitat. És probable que els gels d'electroforesi de l'ADN genòmic extret estiguin en blanc o que només mostrin una feble taca d'ADN i ARN fragmentats, a causa de les petites quantitats d'ADN extret. Tanmateix, això no afectarà els resultats de la PCR.

Composició del reactiu

Solució de lisi : NaOH 25 mM, pH 12.

Tampó neutralitzant : Tris-HCl 100 mM, EDTA 0,5 mM, pH 8.

La formulació està lleugerament modificada respecte a la composició original del reactiu HotSHOT descrita per Truett et al. (2000), que utilitzava 25 mM de NaOH, 0,5 mM d'EDTA per al tampó de lisi alcalina i 100 mM de Tris-HCl per al tampó de neutralització. Aquesta modificació hauria d'allargar la vida útil del tampó de neutralització sense afectar notablement el rendiment.

Emmagatzematge i estabilitat

Emmagatzematge rutinari a temperatura ambient.

L'exposició de la solució de lisi alcalina a l'aire disminuirà gradualment el pH i l'eficàcia d'aquest reactiu amb el temps. L'emmagatzematge temporal de fins a 6 mesos a temperatura ambient hauria de tenir efectes perjudicials mínims si els envasos i les bosses estan correctament segellats. 

Per a un emmagatzematge a llarg termini, comproveu els nivells de pH abans d'utilitzar-lo per comprovar el pH de la solució de lisi alcalina.

Condicions d'enviament

Enviat a temperatura ambient.

Avisos i precaucions de seguretat

Aquest producte i els seus components no es consideren perillosos en les concentracions indicades. La solució de lisi alcalina conté un 0,1% de NaOH (25 mM, pH 12), que està per sota del llindar considerat com a irritant segons (classificació GHS d'acord amb la normativa de la UE i la normativa del Regne Unit).

Tanmateix, com passa amb tots els reactius científics, aquest producte s'ha de manipular i emmagatzemar amb cura com a pràctica habitual. Utilitzeu guants. Cal anar amb compte per evitar el contacte amb la pell o els ulls. En cas de contacte amb la pell o els ulls, renteu immediatament amb aigua. Mantingueu fora de l'abast dels nens.

Protocol d'inici ràpid

Utilitzeu guants i utilitzeu equips i pràctiques de treball estèrils.

1. Feu una llista numerada de mostres i etiqueteu un tub de PCR per mostra amb el número de mostra corresponent utilitzant un retolador permanent de punta fina.
2. Col·loqueu 75 µL de solució de lisi alcalina en un tub de PCR de 0,2 mL per mostra.
3. Preneu una submostra d'1 a 2 mm3 ^de teixit i transferiu-la a cada tub, assegurant-vos que estigui submergit en la solució de lisi alcalina. Afegir un excés de mostra probablement farà que l'extracció i/o la PCR fallin.
4. Col·loqueu els tubs en un termociclador i incubeu-los a 95 °C durant 10-30 minuts (segons el tipus de mostra) utilitzant el programa Heat Block.
5. Afegiu 75 µL de tampó neutralitzant a cada tub de 0,2 mL.
6. Utilitzeu d'1 a 4 µL d'extracte com a font de plantilla d'ADN en una reacció de PCR. Els extractes de molts tipus de teixits (per exemple, plantes, fongs, invertebrats, plomes, sang) es poden beneficiar d'una dilució de 10 a 100 vegades per diluir els inhibidors de la PCR abans d'utilitzar-los com a plantilla d'ADN.
7. Guardeu els tubs de mostra en una caixa de 0,2 mL o una bossa petita, clarament etiquetada per evitar confusions. Refrigereu-los a curt termini o congeleu-los a –20 °C per a un emmagatzematge a llarg termini.